在棉花枯萎病新杀菌剂毒力测定中助溶剂的筛选

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��a�[.��1�׃1#�G�i�o�[�j���h���ky"https://www.hanjia777.com/k/xuesheng/" target="_blank" class="keylink">学生命科学技术学院陈守文教授提供。

1.3 药剂抑菌率测定方法

分别取一定量的以上3种供试药剂，制备一定质量浓度的母液，每种药剂分别用无菌水稀释成5个不同浓度梯度，在无菌工作台上用无菌吸管吸取1 mL药液（以无菌水为对照）加入到直径为7.5 cm培养皿中，再用无菌注射器加入9 mL熔化后的50℃～60℃的PDA培养基，使药剂与培养基混匀，冷却至室温。然后，向培养皿中接种直径为5 mm的棉花枯萎病菌菌块，在28 ℃恒温培养箱中培养5～7 d，待对照接近长满培养皿时，用十字交叉法测量菌落直径，3次重复，取平均值，计算药剂的菌丝抑菌率。

菌丝抑菌率（%）=

1.4 毒力回归分析

以药剂质量浓度的对数值为自变量X，以菌丝抑菌率机率值为因变量Y，计算出毒力回归方程和相关系数R，根据回归方程求出抑菌中质量浓度EC50值。此过程用软件SPSS 16.0计算完成。

2 结果与分析

2.1 有机助溶剂对棉花枯萎病菌的毒力回归分析

实验选择的3种有机助溶剂对棉花枯萎病菌的毒力测定结果见表1。从表1可以看出：丙酮、DMF、DMSO对棉花枯萎病菌的毒力回归方程分别为y=-9.8235+2.8425x、y=-0.5508+1.6224x、y=-2.2364+1.6961x；建立该回归方程的相关系数（R）分别为0.9805、0.9805、0.9979，相关性较好；抑菌中质量浓度EC50值分别为163195.4、2704.8、1848.5 mg/L。根据EC50的大小，EC50值越小，表明毒力越大，3种不同有机溶剂对棉花枯萎病菌的毒力大小为：DMSO>DMF>丙酮。毒力越大，作为助溶剂，对新杀菌剂或新化合物杀菌毒力测定干扰就越大，越不安全。 因此，助溶剂的安全性与毒力相反，这三种助溶剂的安全顺序是丙酮>DMF>DMSO。

2.2 有机助溶剂对棉花枯萎病菌的菌丝生长抑制作用和安全性分析

3种不同有机溶剂，在不同质量浓度区间对棉花枯萎病菌的抑菌作用不同（表2）。丙酮、DMF和DMSO分别在0～50000、0～1250 和0～2500 mg/L质量浓度区间，对棉花枯萎病菌都有抑菌活性，其抑菌率分别为0～9.2%、0～22.2%和0～6.8%（表2），说明上述3种有机溶剂在各自不同质量浓度区间，对棉花枯萎病菌均有一定的杀灭效果，它们用作棉花枯萎病新杀菌剂或新化合物毒力测定的助溶剂，都具有一定的不安全性，都不是绝对安全的。

同时，从表2可以看出，3种有机溶剂，其各自最低抑菌质量浓度和最低抑菌率不同。丙酮、DMF和DMSO三种有机溶剂在质量浓度分别低至50000、1250、2500 mg/L时，其对棉花枯萎病菌的抑菌率分别为9.2%、22.2%、6.8%；作为助溶剂，这3种有机溶剂的相对安全的质量浓度区间分别为0～50000、0～1250、0～2500 mg/L，其抑菌率分别为0～9.2%、0～22.2%、0～6.8%。因为丙酮的质量浓度50000 mg/L比DMSO的质量浓度2500 mg/L高20倍，而抑菌率差异不大，分别为9.2%、6.8%，说明丙酮的安全性高于DMSO约20倍。因此，在三种有机溶剂中，最安全的助溶剂是丙酮，其相对的安全质量浓度区间为0～50000 mg/L。

3 讨论

在农药新杀菌剂杀菌活性的毒力测定中，对不溶于水的新化合物，添加少量有机溶剂助溶，是很普遍现象，通常认为，加入少量助溶剂对实验结果影响不大。通过研究证明，添加的助溶剂对植物病原菌棉花枯萎病菌均有一定的毒力，这与文献报道的有机助溶剂对草坪褐斑病菌也有一定毒力是类似的 [8]。因此，在新杀菌剂毒力测定之前，进行安全助溶剂筛选和安全质量浓度区间的测定，对新杀菌剂毒力的科学评价具有重要意义。

丙酮、DMF、DMSO除了是最常用的有机溶剂外，它们均有各自的广泛用途[9-10]，有关这三种物质各方面应用的研究报告很多，而作为助溶剂，应用于农药毒力测定工作的研究报告很鲜见 [8]，通过测定3种有机溶剂对棉花枯萎病菌的毒力，进行安全助溶剂的筛选，得出如下结论：（1）丙酮、DMF和DMSO这3种有机溶剂对棉花枯萎病菌的毒力大小为：DMSO>DMF>丙酮，安全性与毒力大小相反，这3种有机溶剂作为助溶剂的安全顺序是：丙酮>DMF>DMSO；（2）丙酮、DMF和DMSO分别在各自不同质量浓度区间，对棉花枯萎病菌都有杀菌活性，因此，这3种有机溶剂作为助溶剂，对棉花枯萎病菌都不是绝对安全；（3）在棉花枯萎病新杀菌剂毒力测定时，这3种有机溶剂的相对安全的质量浓度区间分别为0～50000、0～1250、0～2500 mg/L，在此安全质量浓度区间，其抑菌率分别为0～9.2%、0～22.2%、0～6.8%，其中，首选安全助溶剂为丙酮，其相对安全质量浓度区间为0～50000 mg/L。在新化合物杀菌毒力测定的实际操作中，加入丙酮作为助溶剂的质量浓度远远低于50000 mg/L，因此，丙酮作为安全助溶剂，在棉花枯萎病菌毒力测定中具有一定的应用价值。

通过本实验，基本弄清楚了3种有机溶剂作为助溶剂对棉花枯萎病菌的毒力大小与相对安全质量浓度区间，筛选出了安全助溶剂丙酮以及相对安全的添加质量浓度区间，该实验结果为棉花枯萎病新的杀菌剂研发和应用，提供了一定的科学依据。

参考文献

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