液相色谱—串联质谱联用技术测定酒类产品中γ—氨基丁酸

材料与方法

1.1 试验仪器和试剂

试验用液质联用仪：液相色谱四极杆串联质谱（电喷雾电离源（ESI））安捷伦6410，液相色谱系统包括自动进样器。

试验试剂：γ-氨基丁酸标准样品（含量为99%，SIGMA公司生产），甲醇（色谱纯）。

1.2 仪器分析条件

1.2.1 液相色谱条件。流动相组成：0.1%乙酸水溶液+甲醇（4+6，体积比）；流速：200 μL/min；注射体积：20 μL；柱温：26 ℃。

1.2.2 质谱条件。离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；干燥气温度：350 ℃；干燥气流速：10 L/min；雾化器压力；275.8 kPa；毛细管电压：4 000 V。

1.3 试验方法

白酒：直接移取1 mL试样过0.22 μm滤膜；葡萄酒和果酒：移取5 mL试样冷冻离心（10 000 r/min，15 min，2～4 ℃），取上清液过0.22 μm滤膜，根据其含量直接或稀释液相色谱—质谱/质谱测定。

2 结果与分析

2.1 γ-氨基丁酸分析条件确定

γ-氨基丁酸化分子量103，在液质里选择正离子模式，得到母离子[M+1]为103.9，在一定碰撞电压和能量下，失去NH3得到子离子M/Z：86.9，再失去1个H2O得到子离子M/Z：68.9，具体碰撞条件见表1，母离子和子离子在液质中形成见图1，色谱图见图2。

2.2 前处理方法

γ-氨基丁酸在白酒含量较低，一般直接过0.22 μm滤膜进样测定。葡萄酒和果酒冷冻离心（10 000 r/min，15 min，2～4 ℃），去除部分酒石酸盐类、单宁、果胶、色素等，取上清液过0.22 μm滤膜，根据其含量直接或稀释进样。

2.3 线性关系和检出限

配制不同浓度梯度的γ-氨基丁酸溶液，其浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.10、0.20、0.50 mg/L。在试验设定条件，将γ-氨基丁酸的质量浓度（mg/L）作为横坐标X，将γ-氨基丁酸的峰面积作为纵坐标Y进行线性回归，确定回归方程为Y=177.4X，回归系数r2=0.999 1，具有良好的线性关系。当信噪比（S/N）=3时，仪器检出限为0.003 mg/L。

2.4 方法的精密度和回收率

取不含γ-氨基丁酸的白酒10 mL作为空白基质，分别添加5 mg/L标液0.08、0.20、0.40 mL共3组，每组6份，进行平行试验。按照试验方法进行前处理和仪器分析测定，计算回收率和精密度试验数据，结果见表2。

从表2可以看出，采用该方法能够使回收率达到85%以上，相对标准偏差RSD小于6%。采用该方法能够获得较高的测量精密度和准确度。

2.5 样品测定

依据《国家食品安全标准 食品添加剂使用标准（GB2760-2014）》，化学合成的γ-氨基丁酸可作为在食品生产中能够作为香料使用，但要控制使用量和使用范围。在白酒中，γ-氨基丁酸是按生产需要适量使用。在市场抽取白酒样品近50组，运用液相色谱—四极杆串联质谱联用技术测定，共检出5组样品含有γ-氨基丁酸，含量为0.1～0.8 mg/L。

3 结论

运用液相色谱—四极杆串联质谱联用技术测定酒类中γ-氨基丁酸，当浓度在0.01～0.50的范围内，表现出良好的线性关系。该方法具有前处理方法简单、测定过程快速、灵敏度高、测定结果准确等优点。

4 参考文献

[1] 任红波.氨基酸分析仪快速测定糙米中的γ-氨基丁酸[J].杂粮作物，2003，23（4）：246-247.

[2] 夏虹，彭茂民，周有祥.发芽米中γ-氨基丁酸含量的测定[J].食品与机械，2009，25（4）：100-102.

[3] 李常钰，王超超，杨慧萍.发芽糙米中γ-氨基丁酸的富集与测定[J].粮食与饲料工业，2011（2）：5-7.

[4] 赵大伟，普晓英，曾亚文，等.大麦籽粒γ-氨基丁酸含量的测定分析[J].麦类作物学报，2009，29（1）：69-72.

[5] 黄美娥，彭胜，陈阳波，等.南瓜叶中γ-氨基丁酸的提取及薄层扫描测定[J].天然产物研究与开发，2012（24）：1284-1287.

[6] 汤茶琴，张定，陈暄，等.茶叶中γ-氨基丁酸及谷氨酸的纸电泳测定[J].江苏农业学报，2007，23（2）：135-138.

[7] 孔令瑶，汪云，曹玉华.毛细管电泳-电化学法对发芽黑米胚芽中γ-氨基丁酸含量的检测[J].分析测试学报，2008（5）：527-530.

[8] 李炳坤，衷明华.离子色谱法测定桑叶中γ-氨基丁酸[J].韩山师范学院学报，2009，30（6）：62-65.

[9] 李波，李磊，邓旭衡，等.葡萄酒发酵过程中γ-氨基丁酸含量变化的研究[J].中国酿造，2011（7）：171-173.

[10] 徐自奥，张军忠，赵成仕.HPLC-ELSD法测定食品中γ-氨基丁酸含量[J].化学分析计量，2012（5）：49-51.

[11] 赵健，李凤华，杨丽，等.超高效液相色谱-质谱/质谱联用法测定泰山白首乌中γ-氨基丁酸含量及其相关药效分析[J].世界科学技术（中医药现代化），2012（5）：2029-2035.