阴地蕨多糖提取工艺及抗肿瘤活性测定研究

对照D570值-待测样品D570值）/（对照D570值-空白孔D570值）×100

2 结果与分析

2.1 葡萄糖标准曲线

对葡萄糖标准溶液与对应的吸光度，绘制葡萄糖标准曲线，拟合线性方程为Y=0.012X+0.006，R2=0.996，可根据方程计算多糖得率。

2.2 单因素试验

2.2.1 料液比对粗多糖提取率的影响。从图1可看出，起初随着料液比的增加，多糖的提取率随之增加，料液比到达1∶60时多糖提取率达到最高，随后随着料液比的增加，多糖提取率稍呈下降趋势。

2.2.2 温度对多糖提取率的影响。从图2可以看出，随着温度的升高，阴地蕨多糖的提取率相应增加。当温度达到90 ℃时多糖的提取率达到最高，温度再升高到100 ℃时提取率则稍有降低。

2.2.3 时间对多糖提取率的影响。从图3可以看出，随着时间延长，阴地蕨多糖的得率增加，4 h后多糖的提取率随时间延长继续增加，但是增加量不明显。

2.2.4 提取次数对多糖提取率的影响。从图4可以看出，随着提取次数的增多，多糖得率逐渐增加。但是从第3次开始，随着提取次数增多，阴地蕨多糖的提取率虽有继续增加趋势，但是增加量不明显。

2.3 正交试验优化阴地蕨多糖提取工艺

分析表2正交试验结果可知，提取时间对试验结果具有显著性影响，其次是提取次数和温度，用水量对试验结果影响较小。影响总多糖得率的因素主次顺序为B>D>A>C。通过分析4个因素的影响，最优提取工艺组合为A3B3C1D2，即浸提温度为100 ℃，料液比1∶40，浸提时间4 h，浸提次数3次。在此条件下重复进行验证试验3 次，多糖得率分别为5.67%、5.64%、5.58%，多糖的平均提取率为5.63%。说明此提取条件稳定可靠，多糖得率高。

2.4 阴地蕨多糖的抗肿瘤活性

采用MTT法对阴地蕨多糖的抗肿瘤活性进行了初步筛选，结果见表3。可以看出，阴地蕨多糖对3种肿瘤细胞都有细胞毒活性，但是对小鼠结肠癌细胞CT-26和人白血病K562细胞的毒活性较弱，1 mg/mL时抑制率分别只达到27.06%和27.31%，IC50值分别为2.52、2.13 mg/mL；对小鼠白血病细胞WEHI-3抑制率在多糖浓度为1 mg/mL时达到55.36%，IC50值为0.85 mg/mL。

3 结论与讨论

通过正交设计得出阴地蕨多糖的最佳工艺条件为提取温度100 ℃，提取时间4 h，提取次数3次，料液比1∶40，在此条件下多糖得率5.63%，该优化结果对阴地蕨多糖开发利用和生产有重要的参考价值。

通过MTT试验和形态学观察，以3种肿瘤细胞，即人白血病K562细胞、小鼠白血病细胞WEHI-3和小鼠结肠癌细胞CT-26为试验材料对阴地蕨多糖活性进行了初步筛选，检测阴地蕨多糖的细胞毒性及其作用的细胞特异性。由试验结果可知，该多糖对不同种类癌细胞的细胞毒性存在差异。从MTT试验结果的半数抑制浓度IC50可以看出：阴地蕨多糖对3种癌细胞均有不同程度的细胞毒作用，细胞增殖的抑制作用随多糖浓度的加大而增强，呈剂量依赖性，相比之下，多糖对小鼠白血病细胞WEHI-3抑制作用最强，半数抑制浓度IC50为0.85 mg/mL，远大于对其他2种癌细胞的作用。该研究结果为阴地蕨多糖的抗癌作用研究提供了一定的参考。有关阴地蕨多糖的抗癌作用还需进一步深入研究。

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